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新聞資訊

人胱抑素C ELISA 試劑盒

1. 檢測(cè)原理

試劑盒采用**雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(Sandwich ELISA)**定量檢測(cè)人血清、血漿或尿液中的胱抑素C(Cystatin C)濃度。

  • 包被抗體:微孔板預(yù)包被抗人Cystatin C單克隆抗體。

  • 捕獲與檢測(cè):

    • 樣本中的Cystatin C與包被抗體結(jié)合。

    • 加入生物素標(biāo)記的檢測(cè)抗體,形成“抗體-抗原-抗體”復(fù)合物。

    • 加入鏈霉親和素-HRP(Streptavidin-HRP)結(jié)合生物素。

  • 顯色反應(yīng):加入TMB底物后,HRP催化顯色(藍(lán)色),終止后變?yōu)辄S色,在450 nm處測(cè)定吸光度(OD值),OD值與Cystatin C濃度成正比。


2. 適用范圍

  • 樣本類(lèi)型:人血清、血漿(EDTA/肝素抗凝)、尿液(需離心去除沉淀)。

  • 應(yīng)用領(lǐng)域:

    • 腎功能評(píng)估:Cystatin C是腎小球?yàn)V過(guò)率(eGFR)的敏感標(biāo)志物。

    • 心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè):與動(dòng)脈粥樣硬化、心衰相關(guān)。

    • 科研:腎臟疾病、衰老或藥物毒性研究。



3. 試劑盒組成

組分 規(guī)格 保存條件
預(yù)包被微孔板(抗人Cystatin C) 96孔(可拆卸) 2-8°C(干燥)
Cystatin C標(biāo)準(zhǔn)品(0, 0.5, 1, 2, 5, 10 ng/mL) 6管 × 1 mL -20°C(避免凍融)
生物素標(biāo)記檢測(cè)抗體 1瓶 × 6 mL 2-8°C
鏈霉親和素-HRP(SA-HRP) 1瓶 × 6 mL 2-8°C(避光)
TMB底物液 1瓶 × 12 mL 2-8°C(避光)
終止液(1M H?SO?) 1瓶 × 12 mL 室溫
洗滌緩沖液(20×濃縮液) 1瓶 × 50 mL 室溫(稀釋后2-8°C)


4. 樣本采集與處理

  • 血清/血漿:靜脈采血后離心(3000 rpm,10 min),避免溶血或脂血。

  • 尿液:晨尿或隨機(jī)尿,離心(2000 rpm,5 min)后取上清。

  • 儲(chǔ)存:

    • 短期(≤7天):2-8°C。

    • 長(zhǎng)期:-20°C凍存(避免反復(fù)凍融)。


5. 實(shí)驗(yàn)步驟

  1. 試劑準(zhǔn)備:

    • 洗滌液:1×PBS-T(1:20稀釋濃縮液)。

    • 標(biāo)準(zhǔn)品/樣本恢復(fù)至室溫(20-25°C)。

  2. 加樣與孵育:

    • 每孔加入100 μL標(biāo)準(zhǔn)品/樣本,37°C孵育90分鐘。

    • 洗滌3次。

    • 加入100 μL生物素檢測(cè)抗體,37°C孵育60分鐘。

    • 洗滌3次。

    • 加入100 μL SA-HRP,37°C孵育30分鐘。

    • 洗滌5次。

  3. 顯色與終止:

    • 加入100 μL TMB底物,避光室溫反應(yīng)15分鐘。

    • 加入50 μL終止液,立即測(cè)定450 nm OD值。


6. 數(shù)據(jù)分析

  1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn):

    • 以標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/mL)為橫坐標(biāo),OD???為縱坐標(biāo),擬合4參數(shù)邏輯曲線(xiàn)(4PL)。

  2. 樣本計(jì)算:

    • 根據(jù)曲線(xiàn)方程計(jì)算濃度,尿液樣本建議用肌酐校正(μg/g Cr)。


7. 注意事項(xiàng)

  • 避免污染:更換吸頭,避免交叉污染。

  • 干擾因素:

    • 高血脂或溶血樣本需預(yù)處理。

    • 類(lèi)風(fēng)濕因子(RF)可能引起假陽(yáng)性。

  • 質(zhì)量控制:

    • 每板需包含空白孔、標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)和質(zhì)控品。

    • 復(fù)孔CV應(yīng)<10%。



8. 參考范圍

樣本類(lèi)型           正常范圍
     血清/血漿          0.5-1.2 mg/L
     尿液                       <0.3 mg/g


9. 儲(chǔ)存與穩(wěn)定性

  • 未開(kāi)封試劑盒:2-8°C保存,有效期12個(gè)月。

  • 開(kāi)封后:

    • 微孔板:密封后2-8°C保存,1個(gè)月內(nèi)使用。

    • 標(biāo)準(zhǔn)品:-20°C分裝保存。



10. 局限性

  • 不與動(dòng)物Cystatin C交叉反應(yīng):僅檢測(cè)人源樣本。

  • 高濃度樣本:需稀釋后復(fù)測(cè)。

  • 對(duì)比方法:結(jié)果可能與免疫比濁法或質(zhì)譜法存在差異。


注:具體操作請(qǐng)以實(shí)際試劑盒說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。

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