本試劑盒采用**雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(Sandwich ELISA)**定量檢測(cè)人血清、血漿或尿液中的胱抑素C(Cystatin C)濃度。
包被抗體:微孔板預(yù)包被抗人Cystatin C單克隆抗體。
捕獲與檢測(cè):
樣本中的Cystatin C與包被抗體結(jié)合。
加入生物素標(biāo)記的檢測(cè)抗體,形成“抗體-抗原-抗體”復(fù)合物。
加入鏈霉親和素-HRP(Streptavidin-HRP)結(jié)合生物素。
顯色反應(yīng):加入TMB底物后,HRP催化顯色(藍(lán)色),終止后變?yōu)辄S色,在450 nm處測(cè)定吸光度(OD值),OD值與Cystatin C濃度成正比。
樣本類(lèi)型:人血清、血漿(EDTA/肝素抗凝)、尿液(需離心去除沉淀)。
應(yīng)用領(lǐng)域:
腎功能評(píng)估:Cystatin C是腎小球?yàn)V過(guò)率(eGFR)的敏感標(biāo)志物。
心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè):與動(dòng)脈粥樣硬化、心衰相關(guān)。
科研:腎臟疾病、衰老或藥物毒性研究。
血清/血漿:靜脈采血后離心(3000 rpm,10 min),避免溶血或脂血。
尿液:晨尿或隨機(jī)尿,離心(2000 rpm,5 min)后取上清。
儲(chǔ)存:
短期(≤7天):2-8°C。
長(zhǎng)期:-20°C凍存(避免反復(fù)凍融)。
試劑準(zhǔn)備:
洗滌液:1×PBS-T(1:20稀釋濃縮液)。
標(biāo)準(zhǔn)品/樣本恢復(fù)至室溫(20-25°C)。
加樣與孵育:
每孔加入100 μL標(biāo)準(zhǔn)品/樣本,37°C孵育90分鐘。
洗滌3次。
加入100 μL生物素檢測(cè)抗體,37°C孵育60分鐘。
加入100 μL SA-HRP,37°C孵育30分鐘。
洗滌5次。
顯色與終止:
加入100 μL TMB底物,避光室溫反應(yīng)15分鐘。
加入50 μL終止液,立即測(cè)定450 nm OD值。
標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn):
以標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/mL)為橫坐標(biāo),OD???為縱坐標(biāo),擬合4參數(shù)邏輯曲線(xiàn)(4PL)。
樣本計(jì)算:
根據(jù)曲線(xiàn)方程計(jì)算濃度,尿液樣本建議用肌酐校正(μg/g Cr)。
避免污染:更換吸頭,避免交叉污染。
干擾因素:
高血脂或溶血樣本需預(yù)處理。
類(lèi)風(fēng)濕因子(RF)可能引起假陽(yáng)性。
質(zhì)量控制:
每板需包含空白孔、標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)和質(zhì)控品。
復(fù)孔CV應(yīng)<10%。
未開(kāi)封試劑盒:2-8°C保存,有效期12個(gè)月。
開(kāi)封后:
微孔板:密封后2-8°C保存,1個(gè)月內(nèi)使用。
標(biāo)準(zhǔn)品:-20°C分裝保存。
不與動(dòng)物Cystatin C交叉反應(yīng):僅檢測(cè)人源樣本。
高濃度樣本:需稀釋后復(fù)測(cè)。
對(duì)比方法:結(jié)果可能與免疫比濁法或質(zhì)譜法存在差異。
注:具體操作請(qǐng)以實(shí)際試劑盒說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。
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