1. 檢測(cè)原理

本試劑盒采用**雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（Sandwich ELISA）**定量檢測(cè)人血清、血漿或尿液中的胱抑素C（Cystatin C）濃度。

• 包被抗體：微孔板預(yù)包被抗人Cystatin C單克隆抗體。

• 捕獲與檢測(cè)：

  • 樣本中的Cystatin C與包被抗體結(jié)合。

  • 加入生物素標(biāo)記的檢測(cè)抗體，形成“抗體-抗原-抗體”復(fù)合物。

  • 加入鏈霉親和素-HRP（Streptavidin-HRP）結(jié)合生物素。

• 顯色反應(yīng)：加入TMB底物后，HRP催化顯色（藍(lán)色），終止后變?yōu)辄S色，在450 nm處測(cè)定吸光度（OD值），OD值與Cystatin C濃度成正比。

2. 適用范圍

• 樣本類(lèi)型：人血清、血漿（EDTA/肝素抗凝）、尿液（需離心去除沉淀）。

• 應(yīng)用領(lǐng)域：

  • 腎功能評(píng)估：Cystatin C是腎小球?yàn)V過(guò)率（eGFR）的敏感標(biāo)志物。

  • 心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)：與動(dòng)脈粥樣硬化、心衰相關(guān)。

  • 科研：腎臟疾病、衰老或藥物毒性研究。

3. 試劑盒組成

4. 樣本采集與處理

• 血清/血漿：靜脈采血后離心（3000 rpm，10 min），避免溶血或脂血。

• 尿液：晨尿或隨機(jī)尿，離心（2000 rpm，5 min）后取上清。

• 儲(chǔ)存：

  • 短期（≤7天）：2-8°C。

  • 長(zhǎng)期：-20°C凍存（避免反復(fù)凍融）。

5. 實(shí)驗(yàn)步驟

1. 試劑準(zhǔn)備：

   • 洗滌液：1×PBS-T（1:20稀釋濃縮液）。

   • 標(biāo)準(zhǔn)品/樣本恢復(fù)至室溫（20-25°C）。

2. 加樣與孵育：

   • 每孔加入100 μL標(biāo)準(zhǔn)品/樣本，37°C孵育90分鐘。

   • 洗滌3次。

   • 加入100 μL生物素檢測(cè)抗體，37°C孵育60分鐘。

   • 洗滌3次。

   • 加入100 μL SA-HRP，37°C孵育30分鐘。

   • 洗滌5次。

3. 顯色與終止：

   • 加入100 μL TMB底物，避光室溫反應(yīng)15分鐘。

   • 加入50 μL終止液，立即測(cè)定450 nm OD值。

6. 數(shù)據(jù)分析

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：

   • 以標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ng/mL）為橫坐標(biāo)，OD???為縱坐標(biāo)，擬合4參數(shù)邏輯曲線(xiàn)（4PL）。

2. 樣本計(jì)算：

   • 根據(jù)曲線(xiàn)方程計(jì)算濃度，尿液樣本建議用肌酐校正（μg/g Cr）。

7. 注意事項(xiàng)

• 避免污染：更換吸頭，避免交叉污染。

• 干擾因素：

  • 高血脂或溶血樣本需預(yù)處理。

  • 類(lèi)風(fēng)濕因子（RF）可能引起假陽(yáng)性。

• 質(zhì)量控制：

  • 每板需包含空白孔、標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)和質(zhì)控品。

  • 復(fù)孔CV應(yīng)＜10%。

8. 參考范圍

9. 儲(chǔ)存與穩(wěn)定性

• 未開(kāi)封試劑盒：2-8°C保存，有效期12個(gè)月。

• 開(kāi)封后：

  • 微孔板：密封后2-8°C保存，1個(gè)月內(nèi)使用。

  • 標(biāo)準(zhǔn)品：-20°C分裝保存。

10. 局限性

• 不與動(dòng)物Cystatin C交叉反應(yīng)：僅檢測(cè)人源樣本。

• 高濃度樣本：需稀釋后復(fù)測(cè)。

• 對(duì)比方法：結(jié)果可能與免疫比濁法或質(zhì)譜法存在差異。

注：具體操作請(qǐng)以實(shí)際試劑盒說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。