MM45T.Li細(xì)胞 細(xì)胞的常規(guī)觀察
細(xì)胞接種或傳代以后，實(shí)驗(yàn)者每天或至多間隔1～2d，要對(duì)細(xì)胞做常規(guī)性檢查。觀察細(xì)胞形態(tài)和生長情況以及培養(yǎng)的pH變化、有無污染等。根據(jù)細(xì)胞動(dòng)態(tài)變化，做換液或傳代處理，如發(fā)現(xiàn)異常情況應(yīng)及時(shí)采取措施。一. 細(xì)胞復(fù)蘇與培養(yǎng)
將液氮或- 80℃ 保存的腫瘤細(xì)胞于 37℃ 水浴，快速溶化，用 8.0ml 培養(yǎng)基混勻已融化的腫瘤細(xì)胞懸液，于 1500 轉(zhuǎn)/ 分，離心 3 分鐘。 棄上清，再吸取 8.0ml 培養(yǎng)基質(zhì)混勻細(xì)胞沉淀，再 1500 轉(zhuǎn)/ 分，離心 3 分鐘，棄上清，細(xì)胞沉淀用 1.0ml 培養(yǎng)基混勻，備用。 另取一個(gè) 75cm2 方瓶，加入 14.0ml 培養(yǎng)基質(zhì)，將上述制備的含 腫瘤細(xì)胞懸液(1.0ml)加入此方瓶中，于 37℃，5%CO2 孵育箱中培養(yǎng)。 若此腫瘤細(xì)胞懸浮生長，大約 3-4 天細(xì)胞基質(zhì)會(huì)變黃，5.0ml 細(xì)胞懸液可傳代一個(gè)方瓶培養(yǎng)，可用 3-4 個(gè)方瓶培養(yǎng)，一個(gè)方瓶中呈對(duì)數(shù)生長的腫瘤細(xì)胞可達(dá) 1-1.5×107 個(gè)，根據(jù)試驗(yàn)所需，可決定傳代的次數(shù)。 若此腫瘤細(xì)胞呈貼壁生 長，經(jīng)過 3-4 天，腫瘤細(xì)胞生長至 80%-95% 單層時(shí)，棄上清，用 0.5mM 的EDTA(難消化的腫瘤細(xì)胞用0.25%胰酶1.0ml)，處理腫瘤細(xì)胞大約 3-5 分鐘，用倒置顯微鏡觀察，當(dāng) 90% 的腫瘤細(xì)胞變圓時(shí)，即可用彎管吹打并將消化的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到 15ml 離心管中，于 1500 轉(zhuǎn)/ 分下，離心 3 分鐘，棄上清，加少許培養(yǎng)基混勻，可傳代 3 個(gè) 75cm2 方瓶擴(kuò)大培養(yǎng)。
MM45T.Li細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)
生長狀態(tài)良好的細(xì)胞http://xyxwjj.cn/goodsid/fenleier/2909278/1.html，在一般顯微鏡下觀察時(shí)可見，細(xì)胞透明度大、折光性強(qiáng)、輪廓不清。細(xì)胞生長**時(shí)，輪廓增強(qiáng)，胞質(zhì)中常出現(xiàn)空泡、脂滴和其他顆粒狀物，細(xì)胞之間空隙加大，細(xì)胞形態(tài)可變得不規(guī)則甚至失去原有特點(diǎn)，如上皮細(xì)胞變成類上皮細(xì)胞等VX2細(xì)胞某些染料當(dāng)細(xì)胞死亡時(shí)能透過變性的胞膜與解體的細(xì)胞核DNA結(jié)合，而令其著色。因而常用臺(tái)盼藍(lán)(trypan blue) 鑒別細(xì)胞死活，活細(xì)胞不著色，死細(xì)胞核呈藍(lán)色。二. 細(xì)胞凍存
將對(duì)數(shù)生長的腫瘤細(xì)胞用 1 個(gè) 75cm2 方瓶按上述方法收集，于 1500 轉(zhuǎn)/分離心 3 分鐘，棄上清，用保種液( 含 10% DMSO 的小牛血清)3.0ml 混勻，分別加入到 2-3 只保種管中，寫上腫瘤細(xì)胞名稱、時(shí)間、保種者姓名，放- 80℃ 保存，次日將它們轉(zhuǎn)移到液氮中保存( 注： -80℃ 下可保存細(xì)胞半年至一年，液氮可保存細(xì) 胞 5-10 年，甚至更長的時(shí)間)。以上所有物品均需經(jīng)過高溫滅菌 ( 121℃，30 分鐘) ，培養(yǎng)基質(zhì)則經(jīng)過過濾(0.22uM)除菌，所有操作均必須遵守?zé)o菌操作技術(shù)，避免細(xì)菌、真菌、病原體、衣原體等污染。
MM45T.Li細(xì)胞 注意事項(xiàng)：
1、嚴(yán)格無菌操作.操作間隔應(yīng)讓無菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘以上后，再進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株之操作;無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時(shí)放置，其它實(shí)驗(yàn)用品用完即應(yīng)移出，以利于氣流之流通。實(shí)驗(yàn)用品以70%ethanol擦拭后才帶入無菌操作臺(tái)內(nèi)。MM45T.Li細(xì)胞，拜力生物常年供應(yīng)，量大從優(yōu)。訂購專線：021-33779008。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在抬面之中央無菌區(qū)域，勿在邊緣之非無菌區(qū)域操作
2、*初接種的培養(yǎng)瓶應(yīng)盡量小些，而接種的細(xì)胞數(shù)應(yīng)盡量多些。
3、細(xì)胞在體外進(jìn)行培養(yǎng),失去了機(jī)體的調(diào)節(jié)和控制,因此,除滿足營養(yǎng)的要求外,還必須使細(xì)胞生存環(huán)境晝接近活體的環(huán)境.外環(huán)境的培養(yǎng)條件如溫度、滲透壓、酸堿度等均能影響細(xì)胞的生長.
MM45T.Li細(xì)胞 更多產(chǎn)品信息:
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A304NAD激酶(NADK)試劑盒可見分光光度法50管/48樣
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B402胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)試劑盒紫外分光光度法50管/48樣
B403蘋果酸酶(ME)試劑盒紫外分光光度法50管/48樣
