關(guān)鍵詞:enogene
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一、原理
本CCK-8 細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒含有CCK-8，在電子載體存在的情況下CCK-8 被細(xì)胞內(nèi)脫氫酶氧化還原后生成水溶性的橙黃色甲臜染料能夠溶解在組織培養(yǎng)基中，生成的甲臜量與活細(xì)胞數(shù)量成正比。該無(wú)菌CCK-8 溶液可以直接加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中；不需要預(yù)配其它成分。CCK-8 法是用于測(cè)定細(xì)胞增殖或毒性實(shí)驗(yàn)中活細(xì)胞數(shù)目的一種高靈敏度，無(wú)放射性的比色檢測(cè)法,可替代傳統(tǒng)的MTT 法。
二、試劑盒組成
目錄號(hào)組份規(guī)格儲(chǔ)存條件
E1CK- 000208-1 CCK-8 溶液1mL（100 *****s） 4℃避光，一年有效
E1CK- 000208-5 CCK-8 溶液5mL（500 *****s） 4℃避光，一年有效
E1CK- 000208-10 CCK-8 溶液10mL（1000 *****s） 4℃避光，一年有效
三、自備物品
低速離心機(jī)、酶標(biāo)儀（450nm 波長(zhǎng)）、平板搖床、微量移液器、96 孔培養(yǎng)板、CO2 培養(yǎng)箱
四、操作步驟
1. 在96 孔板中加入100 ul（約1×104）的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24 小時(shí)(在37℃，5% CO2的條件下)。
2. 向培養(yǎng)板中加入100 ul完全培養(yǎng)基或含有不同濃度受試樣品的完全培養(yǎng)基。
3. 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間(例如: 48小時(shí)或72小時(shí))。
4. 每孔加入10 ul CCK-8溶液(盡量不要在孔中生成氣泡)。
5. 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。
6. 用酶標(biāo)儀測(cè)定在450 nm處的吸光度。
7. 如果暫時(shí)不測(cè)定O.D值，打算以后測(cè)定的話，可以向每孔中加入10 μl 0.1 M HCl溶液或者1%（W/V）SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。
五、結(jié)果判斷
(1) 細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（完全培養(yǎng)基加CCK-8，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取均數(shù)±SD。
細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。
細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100
(2) 求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)或T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)。