關鍵詞:真核表達技術服務|實驗技術服務
簡介：世界****真核表達技術服務|實驗技術服務原裝**，質(zhì)量保證,價格優(yōu)惠。
真核表達技術服務|實驗技術服務——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經(jīng)驗及實驗操作技巧，承諾客戶不成功不收費。我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信，我們提供原始的表達菌株和克隆質(zhì)粒，客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復我們的實驗結果。
產(chǎn)品品牌：真核表達技術服務|實驗技術服務   http://xyxwjj.cn/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
測序實驗流程：
pEGFP-N1載體具有以下幾方面特點：
①從結構上看，該質(zhì)粒具有很強的復制能力，可以滿足隨宿主細胞分裂時跟隨胞質(zhì)遺傳給新生的子細胞，這（圖）真核細胞表達載體
真核細胞表達載體
是保證目的基因穩(wěn)定表達的因素之一；
②含有高效的功能強大的啟動子SV40和PCMV，可以使目的基因在增殖的細胞中穩(wěn)定表達；
③具有多克隆位點，便于目的基因的插入；
④該載體具有neo基因，可以采用G418來篩選已成功轉染了該載體的靶細胞。
綠色熒光蛋白(Green Fluorescent Protein，GFP)基因來源于Jellyfish Aequorea Victoria， 是Shimomura等于1962年發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)，由238個氨基酸組成，分子量約為27Kd。GFPGFP在包括熱、極端PH和化學變性劑等苛刻條件下都很穩(wěn)定，用甲醛固定后會持續(xù)發(fā)出熒光，但在還原環(huán)境下熒光會很快熄滅。
與以往常用的報告基因相比，GFP具有以下優(yōu)點：
①在熒光顯微鏡下，用波長約490 nm的紫外線激發(fā)后，即可觀察到綠色熒光，直接、簡捷、便于檢測；
②無需任何的作用底物或共作用物,檢測的靈敏度不受反應效率的影響，保證了極高的檢出率；
③蛋白本身性質(zhì)穩(wěn)定；
④可在多種異源生物中表達且無細胞毒性；
⑤其基因片段長度較小(約717 bp)，易于構建融合蛋白，且融合蛋白仍能保持熒光激發(fā)活性，為研究其他基因表達產(chǎn)物的分布提供了方便。EGFP是一種優(yōu)化的突變型GFP，使其產(chǎn)生的熒光較普通GFP強35倍，大大增強了其報告基因的敏感度。EGFP與其他蛋白的融合表達已有很多成功的例子，而且其N及C端均可融合，并不影響其發(fā)光。
首先也是*重要的的載體的酶切，載體是否沒切好很關鍵。
1.如果有已經(jīng)構建好的PCDNA-A，讓然要和需要的酶切位點一致，直接把這個重組載體用xhol1和Ecorl 1酶切，然后*好CIP（去磷酸化），連接的時候要做自連對照
2.PCDNA載體直接用xhol1和Ecorl 1酶切，酶切后要和未酶切的載體一起跑膠，看一下是否切開
3.查看下PCDNA質(zhì)粒圖譜，看下酶切位點的上下游和你的目的基因設計的引物酶切位點的上下游是否一致
4.做連接的時候要做對照.
5.可以用其他載體用同樣的酶切，比如pet-28a，看能否連上目的基因，以此檢驗目的基因是否切好.