關(guān)鍵詞:細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
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測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程：
生存期
在細(xì)胞一代中，細(xì)胞能倍增3～6次，經(jīng)歷三個(gè)階段：
潛伏期(latent phase) ：
接種 經(jīng)過 懸浮期(細(xì)胞質(zhì)回縮,胞體呈圓球形) 貼壁。
初代培養(yǎng)細(xì)胞 經(jīng)過 10～24小時(shí)或更多時(shí)間。
連續(xù)細(xì)胞系和癌細(xì)胞系 經(jīng)過 10～30分鐘 貼附。
貼附現(xiàn)象是一個(gè)非常復(fù)雜和受多種因素的影響。
影響細(xì)胞貼附：底物表面不干凈，影響細(xì)胞貼附。
利于細(xì)胞貼附：底物表面帶有陽(yáng)性物質(zhì)與特殊物質(zhì):
纖粘連蛋白(fibronectin FN)、
細(xì)胞表面蛋白(cell surface proteinCSP)
這些物質(zhì)有的存在與細(xì)胞表面,有的來(lái)自血清。
潛伏期特點(diǎn)：
長(zhǎng)短與細(xì)胞接種密度、種類、使用的培養(yǎng)基性質(zhì)有關(guān)。
(1)細(xì)胞貼附后進(jìn)入潛伏期,細(xì)胞無(wú)增殖。少見分裂相，細(xì)胞有運(yùn)動(dòng)活動(dòng)。
(2)初代培養(yǎng) 細(xì)胞潛伏期約為24～96小時(shí)或更長(zhǎng)，
連續(xù)細(xì)胞系和腫瘤細(xì)胞潛伏期約6～24小時(shí)。
(3)細(xì)胞接種密度大潛伏期短。
(4)細(xì)胞出現(xiàn)分裂相增多時(shí)，標(biāo)志細(xì)胞進(jìn)入指數(shù)增生期。
細(xì)胞分裂指數(shù)：
初代細(xì)胞：在0.1%～0.5%之間% ,
連續(xù)分裂細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞：3 ～5%。
指數(shù)增生期是作為細(xì)胞一代活力*好的時(shí)期,是進(jìn)行實(shí)驗(yàn)*好和*主要的階段。
指數(shù)增生期持續(xù)3～5天，細(xì)胞數(shù)量增多后生長(zhǎng)空間變小，細(xì)胞相互接觸可連接成片。
正常細(xì)胞：細(xì)胞相互接觸能抑制細(xì)胞運(yùn)動(dòng)，這種現(xiàn)象稱為接觸抑制(contact inhibition)。
腫瘤細(xì)胞：沒有這種現(xiàn)象，可作為區(qū)別正常與腫瘤細(xì)胞的標(biāo)志之一。當(dāng)腫瘤細(xì)胞達(dá)到一定密度后向三維空間發(fā)展，使細(xì)胞發(fā)生堆積(piled up)。
由于細(xì)胞不斷增殖分裂，細(xì)胞數(shù)量持續(xù)增多，培養(yǎng)液的營(yíng)養(yǎng)成分減少，代謝產(chǎn)物增多，細(xì)胞受營(yíng)養(yǎng)的枯竭和代謝物的影響，則發(fā)生密度抑制(Density inhibition),導(dǎo)致細(xì)胞分裂停止。
停滯期(stagnate phase)
細(xì)胞量和密度達(dá)到飽和，細(xì)胞停滯增殖。表明細(xì)胞進(jìn)入到停滯期,細(xì)胞數(shù)量持平，也稱為平頂期(plateau）。
特點(diǎn)：細(xì)胞不增殖,有代謝活動(dòng)。培養(yǎng)液中的營(yíng)養(yǎng)已逐漸耗盡,代謝產(chǎn)物積累增多,pH降低，此時(shí)需要傳代,否則細(xì)胞將會(huì)中毒,發(fā)生形態(tài)改變,細(xì)胞會(huì)從底物脫落死亡。
注意：
傳代過晚將影響下一代細(xì)胞的生長(zhǎng),至少要再傳 1～2代 ,通過換液淘汰死細(xì)胞和受損較輕的細(xì)胞。待細(xì)胞全部恢復(fù)后再用。