關(guān)鍵詞:細胞劃痕實驗(Wound Healing)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)
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細胞劃痕實驗(Wound Healing)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
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測序?qū)嶒灹鞒蹋?br> 細胞劃痕實驗（Wound Healing)是一種操作簡單，經(jīng)濟實惠的研究細胞遷移/腫瘤侵襲的體外試驗方法。這種方法的原理是，當(dāng)細胞長到融合成單層狀態(tài)時，在融合的單層細胞上人為制造一個空白區(qū)域，稱為“劃痕”。劃痕邊緣的細胞會逐漸進入空白區(qū)域使“劃痕”**。 基本的步驟包括“劃痕”的制造，細胞遷移期間圖像的獲得以及后期數(shù)據(jù)的處理。 
特點： 
1.  在一定程度上模擬了體內(nèi)細胞遷移的過程。
2.  非常適合研究細胞與胞外基質(zhì)（ECM），細胞與細胞之間相互作用引起的細胞遷移。
3.  與包括活細胞成像在內(nèi)的顯微鏡系統(tǒng)兼容，可用于分析細胞間的相互作用。
4.  研究細胞遷移的體外實驗中*簡單的方法。
實驗步驟： 
1.  培養(yǎng)板接種細胞之前先用marker筆在12孔板背面畫橫線標(biāo)記（方便拍照時定位同一 個視野）。
2.  細胞消化后接入12孔板，數(shù)量以貼壁后鋪滿板底為宜（數(shù)量少時可培養(yǎng)一段時間至鋪滿板底）。
3.  細胞鋪滿板底后，用1 ml槍頭垂直于孔板制造細胞劃痕，盡量保證各個劃痕寬度一致。（人工槍頭制造劃痕難以保證劃痕寬度的一致性，影響實驗結(jié)果，這也是該方法*大的缺陷。）
4.  吸去細胞培養(yǎng)液，用PBS沖洗孔板三次，洗去劃痕產(chǎn)生的細胞碎片。
5.  加入無血清培養(yǎng)基，拍照記錄。
6.  將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)，每隔4-6小時取出拍照。
7.  根據(jù)收集圖片數(shù)據(jù)分析實驗結(jié)果。
流程：
1.先用marker筆在6孔板背后，用直尺比著，均勻得劃橫線，大約每隔0.5~1cm一道，橫穿過孔。每孔至少穿過5條線。
2.在空中加入約5X105個細胞，具體數(shù)量因細胞不同而不同，掌握為能鋪滿。
3.**天用槍頭比著直尺，盡量垂至于背后的橫線劃痕，槍頭要垂直，不能傾斜。
4.用PBS洗細胞3次，去處劃下的細胞，加入無血清培養(yǎng)基。
5.放入37度5%CO2培養(yǎng)箱，培養(yǎng)。按0，6，12，24小時取樣，拍照。