關鍵詞:探針合成|實驗技術服務
簡介：世界****探針合成|實驗技術服務原裝**，質量保證,價格優(yōu)惠。
探針合成|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經驗及實驗操作技巧，承諾客戶不成功不收費。我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信，我們提供原始的表達菌株和克隆質粒，客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復我們的實驗結果。
產品品牌：探針合成|實驗技術服務   http://xyxwjj.cn/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
測序實驗流程：
1、  合成cDNA步驟
（1）    加入從卵巢癌細胞或組織中提取的總RNA ≥ 5ug。
（2）    加入 Nuclease-free 水 75 ul
（3）    加入 5x iScript Reaction Mix，按20 ul/ 100ul 比例加入。
（4）    加入 iScript RT，5 ul.
（5）    在pcr儀上，按以下步驟進行加熱：
5 minutes at 25°C；30 minutes at 42°C；5 minutes at 85°C。
儲存在 –20C冰箱。
2、  擴增ERCC2目的片段
（1）   訂購ERCC2引物，序列如下：
F：5'-CCGctcgagGCTCCTGGTCTACTTCCCGTACG-3'
R：5'-ATTTgcggccGCACGCAGCCGCCACTTCACGTAC-3'
（2）   準備反應液：
按以下試劑比例進行反應MIX的配置：
10x reaction buffer                            5 ul (1x)
dNTPs (stock 10 mM)                            1.0 ul (200uM
Forward primer (250uM)                        1.0 ul (0.2 uM)
Reverse primer (250 uM)                     1.0 ul ( 0.2 uM)
cDNA template                             1 ul  (1 ug)
Taq PCR Polymerase enzyme                  0.5 ul
ddH20                                        up to     50 ul
Total                                                50 ul
（3）   PCR 反應過程
1)        準備PCR儀，并檢查是否可用。
2)        打開PCR儀頂蓋，將96PCR板放置在加熱模塊上蓋緊頂蓋；
3)        選擇程序如下：
1cycle：94’C，3 min  
35 cycles： 94’C，30s；62’C，1 min；72’C，1.5 min             
1cycle：72’C，7 min；4’C    forever