關(guān)鍵詞:免疫組化|實驗技術(shù)服務(wù)
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測序?qū)嶒灹鞒蹋?br> 免疫組織化學(xué)技術(shù)按照標(biāo)記物的種類可分為免疫熒光法、免疫酶法、免疫鐵蛋白法、免疫金法及放射免疫自顯影法等。
一 免疫組化（LP 法）操作步驟
1． 切片常規(guī)脫蠟至水。如需抗原修復(fù)，可在此步后進行
⒉ 緩沖液洗 3min/2 次。
⒊ 為了降低內(nèi)源性過氧化物酶造成的非特異性背景染色，將切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分鐘。
⒋ 緩沖液洗 5min/2 次。
⒌ 滴加 Ultra V Block ， 在室溫下孵育 5 分鐘以封閉非特異性的背景染色。
（注：孵育不要超過 10 分鐘，否則會導(dǎo)致特異性染色降低。如果一抗的稀釋液中含有 5 － 10% 正常羊血清，這一步可以省略。）
⒍ 緩沖液洗 5min/2 次。
⒎ 滴加一抗工作液 37 ℃孵育 1 － 2 小時。（具體孵育時間和溫度由試驗者*終決定）
⒏ 緩沖液洗 5min/2 次。
9 ． 滴加 Primary Antibody Enhancer（增強子），在室溫下孵育 20 分鐘。
10 ．緩沖液洗 5min/2 次。
11 ．滴加 HRP Polymer（酶標(biāo)二抗） ，在室溫下孵育 30 分鐘。
（注：HRP Polymer 對光敏感，應(yīng)避免不必要的光暴露并儲存在不透明的小瓶中。）
12 ．緩沖液洗 5min/2 次。
13 ．向 1ml DAB Plus Substrate （或 AEC Plus Substrate) 中滴加 1-2 滴 DAB Plus Chromogen （或 AEC Plus Chromogen），混勻后滴加到切片上，孵育 3 － 15 分鐘。（具體時間由染色深淺決定。）
14 ．自來水充分沖洗，復(fù)染，脫水，透明，封片。
二．免疫組化操作步驟
⑴、石蠟切片脫蠟至水。
⑵、 3%H 2 O 2 室溫孵育 5-10 分鐘，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。
⑶、蒸餾水沖洗， PBS 浸泡 5 分鐘 x2 （如需抗原修復(fù)，可在此步后進行）。
⑷、 5-10% 正常山羊血清（PBS 稀釋）封閉，室溫孵育 10 分鐘，傾去血清，勿洗。滴加 一抗 工作液， 37 ℃ 孵育 1-2 小時或 4 ℃ 。
⑸、 PBS 沖洗， 5 分鐘 x3 次。
⑹、滴加適量 生物素標(biāo)記二抗 工作液， 37 ℃ 孵育 10-30 分鐘。
⑺、 PBS 沖洗， 5 分鐘 x3 次。
⑻、滴加適量的 辣根酶或堿性磷酸酶標(biāo)記的鏈霉卵白素 工作液， 37 ℃ 孵育 10-30 分鐘。
⑼、 PBS 沖洗， 5 分鐘 x3 次。
⑽、顯色劑顯色 3-15 分鐘（DAB 或 NBT/BCIP）
⑾、自來水充分沖洗，復(fù)染，脫水，透明，封片。