關(guān)鍵詞:抗體定制技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)
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抗體定制技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設(shè)計經(jīng)驗及實驗操作技巧，承諾客戶不成功不收費。我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信，我們提供原始的表達菌株和克隆質(zhì)粒，客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復我們的實驗結(jié)果。
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測序?qū)嶒灹鞒蹋?br> 抗體檢測服務(wù)
ELISA（酶聯(lián)免疫吸附實驗）
Dot Blot（斑點印跡實驗）
Western Blot（免疫印跡實驗）
IHC （免疫組織化學實驗）
抗體標記服務(wù)
HRP（辣根過氧化物酶）
Biotin（生物素）
操作方法
⑴準備好脾細胞。
⑵在50ml沉淀管中混合108脾細胞和107小鼠骨髓瘤細胞，并加入50ml2.5%FCS－1640液。
⑶室溫400g離心3min，使細胞沉淀。
⑷移去上清液。
⑸輕敲管底部，使沉淀流動，把沉淀管放于40℃水浴中，使其達融合溫度。
⑹加預熱至40℃的50%PEG0.8ml，用1ml吸管緩慢滴加，邊加邊搖沉淀管，肉眼觀察可見有顆粒出現(xiàn)，滴加過程要求持續(xù)2min。
⑺加1ml1640液，邊加邊搖動，持續(xù)1min。
⑻重復⑺一次。
⑼加1ml1640液，邊加邊搖動，持續(xù)0.5min。
⑽重復⑼一次。
⑾加1640液15ml。
⑿室溫，400g離心1min，使細胞沉淀。
⒀去上清，輕敲管底部，加25ml含有HAT的完全1640液。
⒁往已于前一日種有飼養(yǎng)細胞的40孔塑料培養(yǎng)盤中滴加融合的細胞液，每孔1滴（約0.05ml）。
⒂輕搖后，放入5%CO2飽和濕度的37℃溫箱中培育。
⒃第3、6、9、10日換入含HAT的完全1640培養(yǎng)液。注意輕輕吸取上清液，勿將固定于孔底的細胞吸出，根據(jù)需要加入適量的飼養(yǎng)細胞。
⒄于第12、15日加入含有HAT的完全1640培養(yǎng)液。在每次換液前用倒置顯微鏡觀察，大約在10天左右就可觀察到雜交瘤細胞生長出來。大多數(shù)雜交瘤細胞在10~20天內(nèi)出現(xiàn)，但也有在1個月左右才能出現(xiàn)的。雜交瘤細胞出現(xiàn)后，吸取上清液，檢查抗體。
⒅對繼續(xù)生長的雜交瘤細胞進行增殖傳代。在傳代過程中，依情況取消HAT液和完全1640液而代之以10%FCS－1640液。同時保存于液氮和進行克隆化，在這期間每代都要檢查抗體，以防止產(chǎn)生抗體細胞的變異和丟失。