關(guān)鍵詞:基因組DNA提取服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)
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基因組DNA提取服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
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測序?qū)嶒灹鞒蹋?br> DNA提取試劑盒是根據(jù)氯化芐法構(gòu)建的，能夠從樣本中提取基因組DNA的試劑盒。氯化芐具有能將含有纖維素等的細胞壁中的羥基芐基化，從而破壞細胞壁的特性。本制品利用了氯化芐的這一特性，將植物樣品凍結(jié)融解后，再使用Pipet Tip的**將植物樣品在Microtube壁上數(shù)次按壓即可破壞細胞壁。
保存方式
室溫。低溫保存可能會有沉淀析出。如果發(fā)生析出現(xiàn)象，請于50℃溶解后，再于室溫保存。
操作方法
全套操作約需1小時，分勻漿、細胞裂解、除蛋白、DNA純化等步驟，詳細說明如下。
一. 勻漿和細胞裂解。
使用不同的實驗材料需采用不同的勻漿步驟，具體說明如下：
【從動物組織中提取基因組DNA】
使用研缽進行勻漿時：
① 取1～100 mg的動物組織或人組織移入冰浴預(yù)冷的研缽中，快速用力展研成勻漿。
注）下列組織請加液氮研磨至粉末狀。
A．富含DNA酶的胰臟、脾臟、胸腺、淋巴等組織。
B．富含膠原蛋白的皮膚、肌腱等組織。
C．富含角質(zhì)蛋白的組織或堅硬的組織（如骨骼）等。
② 加入650 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1，溫和研磨30秒鐘。
注）使用上述①-注）的實驗材料時，請在加入Solution A及RNase A1后，將研缽置于65℃水浴上研磨1分鐘。
③ 收集650 μl研磨好的組織勻漿液移至Collection Tube中。如果勻漿體積不足650 μl，請補充Solution A至650 μl，65℃保溫5分鐘。
二.使用研磨棒進行勻漿時：
① 取1～100 mg的動物組織或人組織移入冰浴預(yù)冷的Collection Tube 中，用研磨棒快速研磨成糊狀。
② 加入350 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1后用研磨棒快速研磨成勻漿。
③ 加入350 μl的Solution A將研磨棒上的勻漿沖入Collection Tube中，充分振蕩混合后，65℃保溫5分鐘。
三.使用懸浮培養(yǎng)的動物細胞時：
① 使用Collection Tube收集1×105～1.5×107的細胞懸浮液，5,000 rpm離心5分鐘，棄上清（細胞培養(yǎng)液）。
② 加入150 μl的滅菌蒸餾水或PBS懸浮細胞。
③ 加入500 μl的Solution A和0.8 μl的RNase A1，激烈振蕩15秒鐘，然后室溫靜置1分鐘。