關(guān)鍵詞:原位雜交檢測技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)
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原位雜交檢測技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
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測序?qū)嶒灹鞒蹋?br> （1）樣品的固定；
（2）樣品的制備和預處理；
（3）預雜交；
（4）探針和樣品變性；
（5）用不同的探針雜交以檢測不同的靶序列；
（6）漂洗去除未結(jié)合的探針；
（7）檢測雜交信號，進行結(jié)果分析
(1)石蠟切片(5 um)，常規(guī)脫蠟水化： 二甲苯10min×3次、質(zhì)量濃度為100%乙醇5 min×2次、95%乙醇5 min、70%乙醇5min、50%乙醇5 min、自來水洗5 min。
(2)正常山羊血清封閉，37℃ ，30min；
(3)加入I抗(兔抗鼠白蛋白)，37℃ ，1 h；
(4)Ⅱ抗(FITC標記，羊抗兔IgG，)，37℃ ，30min；
(5)8%硫氰酸鈉，80℃ ，10 min；
Devil以新鮮配制的胃蛋白酶(4 mg／m1)將切片于37℃消化1～1.5 h；以甘氨酸溶液終止消化
(7)4%多聚甲醛固定2 min；梯度酒精脫水，空氣干燥；
Musical Note將15ul Y染色體探針(cy3標記)加于組織上，蓋上蓋片，置于雜交盒內(nèi)，60℃變性10 min；37℃ ，避光雜交；
(9)50％甲酰胺／2×SSC，37℃洗滌5 min；2×SSC，37℃洗滌5 min；
(10)0.1% 吐溫20／4×SSC，37℃洗滌10 min，干燥后鏡檢。
雜交所用的探針大致可以分類三類：
1）染色體特異重復序列探針，例如α衛(wèi)星、衛(wèi)星III類的探針，其雜交靶位常大于1Mb，不含散在重復序列，與靶位結(jié)合緊密，雜交信號強，易于檢測；
2）全染色體或染色體區(qū)域特異性探針，其由一條染色體或染色體上某一區(qū)段上極端不同的核苷酸片段所組成，可由克隆到噬菌體和質(zhì)粒中的染色體特異大片段獲得；
3）特異性位置探針，由一個或幾個克隆序列組成。
可采用不同類型的封片液。如果封片液中不含有Mowiol（可使封片液產(chǎn)生自封閉作用），為防止蓋片與載片之間的溶液揮發(fā)，可使用指甲油將蓋片周圍封閉。封好的玻片標本可以在-20～-70℃的冰箱中的暗盒中保持數(shù)月之久。