關(guān)鍵詞:免疫組化技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
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免疫組化技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
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測序?qū)嶒?yàn)流程：
免疫組織化學(xué)技術(shù)按照標(biāo)記物的種類可分為免疫熒光法、免疫酶法、免疫鐵蛋白法、免疫金法及放射免疫自顯影法等。
免疫組化（LP 法）操作步驟
1． 切片常規(guī)脫蠟至水。如需抗原修復(fù)，可在此步后進(jìn)行
⒉ 緩沖液洗 3min/2 次。
⒊ 為了降低內(nèi)源性過氧化物酶造成的非特異性背景染色，將切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分鐘。
⒋ 緩沖液洗 5min/2 次。
⒌ 滴加 Ultra V Block ， 在室溫下孵育 5 分鐘以封閉非特異性的背景染色。
（注：孵育不要超過 10 分鐘，否則會(huì)導(dǎo)致特異性染色降低。如果一抗的稀釋液中含有 5 － 10% 正常羊血清，這一步可以省略。）
⒍ 緩沖液洗 5min/2 次。
⒎ 滴加一抗工作液 37 ℃孵育 1 － 2 小時(shí)。（具體孵育時(shí)間和溫度由試驗(yàn)者*終決定）
⒏ 緩沖液洗 5min/2 次。
9 ． 滴加 Primary Antibody Enhancer（增強(qiáng)子），在室溫下孵育 20 分鐘。
10 ．緩沖液洗 5min/2 次。
11 ．滴加 HRP Polymer（酶標(biāo)二抗） ，在室溫下孵育 30 分鐘。
（注：HRP Polymer 對光敏感，應(yīng)避免不必要的光暴露并儲(chǔ)存在不透明的小瓶中。）
12 ．緩沖液洗 5min/2 次。
13 ．向 1ml DAB Plus Substrate （或 AEC Plus Substrate) 中滴加 1-2 滴 DAB Plus Chromogen （或 AEC Plus Chromogen），混勻后滴加到切片上，孵育 3 － 15 分鐘。（具體時(shí)間由染色深淺決定。）
14 ．自來水充分沖洗，復(fù)染，脫水，透明，封片。
免疫組化SP法步驟：
1.烤片，68℃，20分鐘,
2. 常規(guī)二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水；二甲苯I 20min --二甲苯II 20 min--100%酒精I(xiàn) 10min --100%II 10min --95% 5min-- 80% 5min-- 70% 5min 
3.阻斷 滅活內(nèi)源性過氧化物酶：3%H2O2 37℃孵育10min，PBS沖洗3X5min；
4. 抗原修復(fù):置0.01M枸櫞酸緩沖液（PH 6.0）中用煮沸（95℃，15－20min），自然冷卻20min 以上，再用冷水沖洗缸子，加快冷卻至室溫，PBS沖洗3X5min。
5. 正常羊血清工作液封閉，37℃10 min，傾去勿洗.
6. 滴加一抗4℃ 冰箱孵育，PBS沖洗3X5min（用PBS緩沖液代替一抗作陰性對照）；
滴加生物素標(biāo)記二抗, 37℃孵育30min, PBS沖洗3X5min;
7. 滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉素卵白素工作液，37℃孵育30min, PBS沖洗3X5min;
8. DAB/ H2O2反應(yīng)染色，自來水充分沖洗后，
蘇木素復(fù)染，常規(guī)脫水，透明，干燥，封片。
免疫組化步驟（ABC法）
1。4%多聚甲醛常規(guī)灌注固定，取材并置20%蔗糖溶液（4℃）中。蠟塊制作。切片，貼片。0.01MKPBS清洗5min×3后； 
2。加入配好的0.3%的過氧化氫甲醇溶液（甲醇80ml＋0.01MKPBS 100ml＋30%過氧化氫）30min，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的影響，0.01MPBS清洗5min×3； 
3。加入配好的0.3% Triton X100（30% Triton X100＋0.01MKPBS 100ml）30min，以增加細(xì)胞的通透性，0.01MKPBS清洗5min×3； 
4。加入用血清稀釋液（牛血清白蛋白1.00g＋0.01MPBS 100ml＋疊氮納0.08g）稀釋的一抗，4℃存放24-48h；吸去抗體，0.01MKPBS洗5min×3； 
5。加入0.01MKPBS稀釋的的二抗，室溫孵育2h。0.01MKPBS洗5min×3； 
6。加入ABC復(fù)合物之類的抗體，室溫孵育2h，0.01MKPBS洗5min×3；蒸餾水迅速?zèng)_三次； 
7。加入顯色液，進(jìn)行免疫組織化學(xué)顯色，時(shí)間一般不超過30min，可不時(shí)在顯微鏡下進(jìn)行觀察，待細(xì)胞著色而背底顏色較淡時(shí)馬上吸去顯色液，用蒸餾水迅速?zèng)_三次后加入0.01MKPBS終止反應(yīng)； 
8。梯度酒精脫水之后，封片，拍照。