關(guān)鍵詞:滑膜細胞原代培養(yǎng)|實驗技術(shù)服務(wù)
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滑膜細胞原代培養(yǎng)|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設(shè)計經(jīng)驗及實驗操作技巧，承諾客戶不成功不收費。我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信，我們提供原始的表達菌株和克隆質(zhì)粒，客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復(fù)我們的實驗結(jié)果。
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測序?qū)嶒灹鞒蹋?br> 一、實驗材料準(zhǔn)備
1.   滑膜組織：將外科手術(shù)切下的組織在手術(shù)臺上請將標(biāo)本放入低溫生理鹽水中，在手術(shù)完成時將標(biāo)本放入PBS冰水液中并放入消毒的容器中帶回實驗室。
2.   試劑：4 mg/mlⅠ型膠原酶(α-MEM配制)，培養(yǎng)液(含10%胎牛血清的α-MEM)。
3.   器械：手術(shù)器械。
二、方法
1.   將切下的組織在手術(shù)臺上請將標(biāo)本放入低溫生理鹽水中(靜止)，在手術(shù)完成時將標(biāo)本放入PBS冰水液中并放入消毒的容器中帶回實驗室。
2.  在超凈臺中將標(biāo)本放入培養(yǎng)皿中，加入α-MEM洗滌。
3.  獲得組織切開，仔細辨認(rèn)于關(guān)節(jié)反折處及增生的白色光滑的滑膜組織，附于關(guān)節(jié)軟骨面的增生的血管翳也為滑膜組織(可作另一管消化)，仔細剔除脂肪組織，用α-MEM洗二次(以去除紅細胞)，放在小青瓶中用解剖剪銳性切碎。
4.   用雙倍獲得組織的體積含有4 mg/mlⅠ型膠原酶的α-MEM消化37℃孵育120分鐘(在此期間震動混勻數(shù)次)
5.   30分鐘后收集**管細胞：細胞懸液經(jīng)70 μm細胞濾網(wǎng)過濾，用1500-2000轉(zhuǎn)離心6分鐘，上清為Ⅰ型膠原酶加入未過濾網(wǎng)的組織，繼續(xù)用于消化。
6.   離心管底細胞用α-MEM離心洗滌2次，每次用α-MEM重懸浮后用1500-2000轉(zhuǎn)，離心6分鐘，*后一次用記數(shù)板觀察到有細胞。細胞*終懸浮于含有10%胎牛血清的α-MEM中，接種到培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
7.  60鐘后收集**管細胞：細胞懸液經(jīng)70 μm細胞濾網(wǎng)過濾，用1500-2000 rpm離心6分鐘；用α-MEM洗2次，每次用α-MEM重懸浮后用1500-2000 rpm離心6分鐘，*后一次用記數(shù)板觀察細胞并計數(shù)。細胞*終懸浮于α-MEM含有10%胎牛血清中，接種到培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
8.   必要時可做第三管細胞收集；并立即作原代滑膜細胞培養(yǎng)。
9.  每2-3天換液一次。
注意事項
1.   用0.25% trypsin或0.25% trypsin＋ 0.02% EDTA 或 collagenaseⅠ或collagenaseⅡ消化細胞或合用，只有單用collagenaseⅠ有用、*好；
2.   機械法很難獲得細胞；
3.  全培用α-MEM或RPMI1640或DMEM，加10%胎牛血清。不能用小牛血清，胎牛血清用國產(chǎn)即可；
4.  必須用Ca2+-free的PBS。